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病理實驗外包，南京英瀚斯可開展冰凍切片免疫熒光染色1.  冰凍切片室溫晾干15 min，可用含10%正常山羊血清的PBS室溫封閉切片1小時（此步可不洗）。2.  滴加適當比例稀釋的一抗或一抗工作液（抗體的量視組織大小而定，原則是可以均勻覆蓋組織面，且保證整個過程中不會使組織干涸）。3.  將切片放在加了PBS的免疫組化濕盒，室溫孵育2小時或4℃過夜。4.  第二天先將濕盒放到37℃回溫1 h，然后吸取片上的一抗進行回收，將切片插入到小染缸PBS沖洗。5.  滴加用PBS稀釋好的二抗（避光）置于分子雜交箱中37℃孵育1小時。回收二抗，切片置于染缸內(nèi)，PBS洗5 min×3次。6.  滴加DAPI工作液染核，室溫10~20 min（工作濃度0.1%染色15 min）。7.  回收DAPI，滴加5-10 μl 抗熒光衰減封片劑或中性樹膠，用處理干凈的蓋玻片封片，即可到熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下觀察拍照。8.  做好的片放在切片盒內(nèi)，置于4℃冰箱，可保存一周左右。揭開病理實驗外包神秘面紗，南京英瀚斯生物。遼寧生物病理實驗外包公司

病理實驗外包，病理染色HE染色常見問題：Q1：HE染色比較常見的紅藍失調(diào)答：（1）偏藍色：蘇木素染色過深，分化不夠；伊紅試劑過期；伊紅染色時間太短，分化過度。（2）偏紅色：蘇木素染色過淺，分化過度；組織固定不佳，細胞核不著色；脫蠟不徹底，蘇木素染不上；蘇木素氧化成熟不夠；伊紅染色過深，分化不足。Q2：HE染色后出現(xiàn)的大白色斑塊或斑點答：脫蠟前烤片溫度偏低，時間過短，蠟未完全融化；切片在脫蠟溶劑中停留時間過短；脫蠟溶劑使用太久，得更新。遼寧比較好的病理實驗外包推薦病理實驗外包檢測，經(jīng)驗豐富，操作熟練。

病理實驗外包，病理染色切片常見問題及解決方法：1.切片粘在切片刀不易取下●原因：切片時有靜電作用，產(chǎn)生靜電吸引，在冬季或氣候干燥時常出現(xiàn)這種情況。●解決方法：可用加濕器。以增加空氣中的水分，而減少靜電作用。2.切片厚薄不均●原因：①切片微動部分失靈，齒輪跳格。②蠟塊太大，過硬，轉(zhuǎn)動時刀刃受震動?！窠鉀Q方法：①修理切片機失靈的部分，調(diào)整螺旋。加機油潤滑零件，必要時需請專業(yè)技術(shù)人員調(diào)整切片機。②如蠟塊過大，以后取材時注意取材的大小。蠟塊組織過硬，可返回水中浸泡，再重新脫水和包埋。

病理實驗外包，病理染色常見染色介紹PAS染色：PAS染色法（PeriodicAcid-Schiffstain）在組織學上，主要用來檢測組織中的糖類。過碘酸把糖類相鄰兩個碳上的羥基氧化成醛基，再用Schiff試劑和醛基反應使呈現(xiàn)紫紅色。PAS染色利用高碘酸把糖類相鄰兩個碳上的羥基氧化成醛基，再用Schiff試劑和醛基反應使呈現(xiàn)紫紅色，顯示糖原定位。染色步驟1.石蠟切片脫蠟至水（細胞涂片，冰凍切片直接水洗）；2.蒸餾水洗；3.過碘酸酒清夜10min；4.自來水沖洗10min；5.Schiff氏液10min；6.流水沖洗5min；7.用哈瑞蘇木精或邁耶蘇木精染核3min(細胞核染色過深可用鹽酸酒精分化）；8.流水沖洗5min；9.常規(guī)脫水、透明、封固。結(jié)果PAS陽性為紅色，細胞核藍色。電鏡檢測，病理實驗外包選南京英瀚斯。

病理實驗外包，病理染色常見染色介紹普魯士藍染色：普魯士藍染色（Prussianbluereaction）又稱為含鐵血黃素染色，即經(jīng)過亞鐵**鉀和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍色，常見于吞噬細胞內(nèi)會間質(zhì)內(nèi)，主要顯示三價鐵鹽。Perls普魯士藍是非常經(jīng)典的組織化學反應，是顯示組織內(nèi)三價鐵的一種敏感、傳統(tǒng)優(yōu)良的方法，其染色原理為：亞鐵**鉀溶液使三價鐵離子從蛋白質(zhì)中被稀鹽酸分離出來，三價鐵與亞鐵**鉀反應，生成一種不溶解的藍色化合物即三價鐵的亞鐵**物普魯士藍，所以該反應被稱為普魯士藍反應。三價鐵的亞鐵**物是一種很穩(wěn)定的化合物，在反應后可用紅色染色劑進行復染，如核固紅、伊紅、中性紅等。Perlsstain常用于顯示局部組織內(nèi)各種出血***變，常見于吞噬細胞內(nèi)。在判斷含鐵血黃素沉積時，用Perls反應可以得到證實，該染色方法可以很好的區(qū)分含鐵血黃素和其他色素。該染色液穩(wěn)定性好、可以長期保存、不易產(chǎn)生沉淀、應用范圍廣、可以進行復染。南京英瀚斯，專業(yè)的病理染色實驗服務平臺。病理實驗外包檢測,醫(yī)學實驗,動物模型構(gòu)建。云南比較好的病理實驗外包

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病理實驗外包，病理染色HE染色常見問題：Q5：細胞核呈棕紅色改變答：蘇木素染液過度氧化；或蘇木素染色后反藍不足導致。應該立即更換蘇木素染色液?；蛟诹鲃幼詠硭?一般自來水PH7.5-7.8)，或在稀釋的氨水溶液，或在0.2%碳酸氫鈉中適當浸泡，這些步驟均可一定程度地加強蘇木素染色后的反藍效果。Q6：伊紅染色較淡答：伊紅的PH改變了(PH可能已大于5)；或反藍液體未漂洗干凈，殘留后影響胞漿嗜酸性染色；或者切片太薄并且在隨后的脫水步驟停留過久。對策：檢查伊紅染色液PH，可采用乙酸調(diào)至4.6-5.0。根據(jù)以上提示，調(diào)整實驗步驟。遼寧生物病理實驗外包公司