湖北大鼠免疫組化外包

免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床cancer良惡性的判斷，英瀚斯生物為您介紹。對于反應(yīng)性增生還是cancer性增生，可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測B淋巴細(xì)胞增生的單克隆或多克隆性來區(qū)別。在濾泡反應(yīng)性增生時，濾泡反應(yīng)中心的細(xì)胞不表達(dá)細(xì)胞凋亡蛋白(bcl-2)，bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中，由于90%以上cancer性濾泡細(xì)胞有bcl-2的高表達(dá)，bcl-2陽性。而增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)，周期素(Cycling)，核抗原(Ki-67)通過對cancer細(xì)胞增生的程度作出評價，從而提示增生細(xì)胞的良惡性。英瀚斯生物，專業(yè)病理染色切片平臺，免疫組化效果好！湖北大鼠免疫組化外包

免疫組化原理及實(shí)驗(yàn)步驟——實(shí)驗(yàn)外包。眾所周知，抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫實(shí)驗(yàn)動物，制備特異性抗體，再用這種抗體（第1抗體）作為抗原去免疫動物制備第二抗體，并用某種酶（常用辣根過氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，形成抗原 - 一抗 - 二抗復(fù)合物，將抗原放大，由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無色的，因此，還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，顯示細(xì)胞或組織中的化學(xué)成分，在顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞或組織原位確定某些化學(xué)成分的分布、含量。山東切片免疫組化檢測英瀚斯生物，專業(yè)病理老師負(fù)責(zé)免疫組化外包！

免疫組化實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)總結(jié)：

?本實(shí)驗(yàn)室所用切片一般是石蠟切片。

?烘片：使蠟片水分蒸發(fā)，石蠟軟化，組織切片牢固貼在玻片上；烘片至跟烘片前透明度有差異。

?抗原修復(fù)時，使片子始終浸沒在修復(fù)液中，液體不能干。

?一抗孵育在37度培養(yǎng)箱，濕盒放置1h，省時間和結(jié)合效果好，不要超過1h，容易過染。

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?二抗使用：兩個二抗放大信號或一個二抗；若抗體信號強(qiáng)，可不用放大信號，盡量增大信噪比。

?10XDAB在常溫溶解，盡可能現(xiàn)用現(xiàn)配，放于4度儲存時間久了效果不佳。

?復(fù)水和脫水時所用的梯度酒精不可混用，要區(qū)分開。

?加抗體和顯色液時，都要將片子甩干，在半干半濕的狀態(tài)下再加，不然容易造成溶液的二次稀釋。

?整個操作過程中在顯色之前，一定不能干片。

免疫組化實(shí)驗(yàn)流程介紹：

英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細(xì)步驟：

1、SP三步法

1）石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。

2）0.3%或3%H2O2去離子水（無色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性。

3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘

4）候選步驟：采用抗原修復(fù)：微波（建議30分鐘內(nèi)4次中火）、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻，再用3分鐘×3次.

5）血清封閉：室溫15-30分鐘，盡可能與二抗來源一致。傾去，勿洗。

6）滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時或4℃過夜（比較好復(fù)溫）。PBS沖洗，3分鐘×5次。

7）滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

8）PBS沖洗，3分鐘×5次。

9）滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

10）PBS沖洗，3分鐘×5次。

11）顯色劑顯色（DAB等）。

12）自來水充分沖洗。

13）可進(jìn)行復(fù)染，脫水，透明。

14）選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?如何做好免疫組化實(shí)驗(yàn)？

免疫組化中免疫膠體金技術(shù)，英瀚斯生物小編為您說明介紹。免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對蛋白的生物學(xué)活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。南京有靠譜的能做免疫組化的公司嗎？山東切片免疫組化檢測

免疫組化怎么做？步驟方法？湖北大鼠免疫組化外包

免疫組化有哪幾種分類 ？

 1）按標(biāo)記物質(zhì)的種類，如熒光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶）、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。

 2）按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步、三步或多步法）。與直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多。

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3）按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合，如過氧化物酶-抗過氧化物酶（***）法；親和連接，如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）法等，其中SP法是比較常用的方法；聚合物鏈接，如即用型二步法，此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測。 湖北大鼠免疫組化外包