中國臺(tái)灣細(xì)胞核熒光染料

小動(dòng)物***成像技術(shù)（invivoimagingtechnology）是利用高靈敏度的光學(xué)檢測儀器直接檢測動(dòng)物***體內(nèi)的細(xì)胞活動(dòng)和基因行為研究的一類技術(shù)，是近年來發(fā)展**快的生命科學(xué)研究方法，是**直接觀察細(xì)胞和分子在體內(nèi)行為的新興技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域[1]。***動(dòng)物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。生物發(fā)光是利用熒光素酶報(bào)告基因在***內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。而熒光發(fā)光成像技術(shù)是將熒光物質(zhì)或熒光物質(zhì)標(biāo)記的小分子物質(zhì)如基因、細(xì)胞也可是小分子藥物、抗體、納米材料等導(dǎo)入到***體內(nèi)，通過小動(dòng)物***成像系統(tǒng)的激發(fā)光源激發(fā)熒光集團(tuán)到達(dá)高能量狀態(tài)，而后產(chǎn)生波長較激發(fā)光長的發(fā)射光，然后通過高靈敏度制冷CCD鏡頭探測到***內(nèi)的發(fā)射光。通過***成像技術(shù)可以觀測***動(dòng)物體內(nèi)**的生長和轉(zhuǎn)移、炎癥的發(fā)生、特定基因的表達(dá)和藥物作用效果等生物學(xué)過程。羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性，使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。中國臺(tái)灣細(xì)胞核熒光染料

南京星葉生物科技有限公司各類熒光染料

多肽、蛋白、抗體標(biāo)記：5(6)-FAM5(6)-FAM5-FAM6-FAM5(6)-FAM,SE5-FAM,SE6-FAM,SE5(6)-TAMRA5-TAMRA6-TAMRA5(6)-TAMRA,SE5-TAMRA,SE6-TAMRA,SE5-ROX6-ROX5-ROX,SE6-ROX,SE***成像：脂溶性熒光染料CY3NHSesterCY3amineCY3maleimideCY3azideCY3COOHCY3alkyneCY3hydrazideCY3ThiolCY5amineCY5NHSesterCY5maleimideCY5azideCY5COOHCY5alkyneCY5hydrazideCY5ThiolCY7amineCY7maleimideCY7azideCY7COOHCY7alkyneCY7hydrazideCY7Thiol水溶性熒光染料Sulfo-Cyanine3NHSesterSulfo-Cyanine3amineSulfo-CY3azideSulfo-CY3carboxylicacidSulfo-CY3alkyneSulfo-CY3hydrazideSulfo-CY3ThiolSulfo-Cyanine5NHSesterSulfo-Cyanine5amineSulfo-CY5azideSulfo-CY5carboxylicacidSulfo-CY5alkyneSulfo-CY5hydrazideSulfo-CY5ThiolCY7NHSesterSulfo-Cyanine7NHSesterSulfo-Cyanine7amineSulfo-CY7azideSulfo-CY7carboxylicacidSulfo-CY7alkyneSulfo-CY7hydrazideSulfo-CY7Thiol近紅外I區(qū)/II區(qū)熒光染料ICG-NHSesterICG-amineICG-maleimideICG-azideICG-COOHICG-alkyneICG-hydrazideICG-ThiolICG-TzICG-DBCO 福建顯微鏡熒光染料Super Fluor 750（效果同Alexa Fluor 750）熒光染料。

細(xì)胞培養(yǎng)后，需要對(duì)其生長情況、形態(tài)甚至生物學(xué)性狀進(jìn)行觀察。由于細(xì)胞小而復(fù)雜，若不借助適當(dāng)?shù)氖侄?，難以觀察其形態(tài)、結(jié)構(gòu)，更難發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)各種組分的分子組成及功能。目前，已有多種研究細(xì)胞的技術(shù)，從光學(xué)顯微鏡到電子顯微鏡，從一般細(xì)胞化學(xué)法到免疫化學(xué)法。細(xì)胞染色是研究細(xì)胞生物學(xué)特征的一種常用手段，然而，對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)新手來說，想要獲得一張漂亮的細(xì)胞染色圖并不容易。染色試劑不會(huì)選、細(xì)胞染色不均勻、染色時(shí)切片脫落等都是很常見的問題。

細(xì)胞膜常用染料DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細(xì)胞膜染料（見表2），它們是一族親脂性的熒光染料，用于細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)研究。該系列染料進(jìn)入細(xì)胞膜后，會(huì)在整個(gè)細(xì)胞膜上側(cè)向擴(kuò)散，在比較好濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高，染色均一，熒光不易猝滅，無明顯細(xì)胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DiD已成功應(yīng)用于多種細(xì)胞的體內(nèi)示蹤研究，如Treg細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、造血干祖細(xì)胞等。

一：染色液制備1、配制儲(chǔ)液：儲(chǔ)液用無水DMSO或無水EtOH配制，濃度1~5mM。注：未使用的儲(chǔ)液建議分裝后儲(chǔ)存在-20℃，避免反復(fù)凍融。2、工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲(chǔ)液，配制濃度為1~5μM的工作液。注：工作液**終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始比較好濃度的摸索。二：懸浮細(xì)胞染色1、加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×106/mL。2、37℃孵育細(xì)胞2~20min，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?0min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。3、孵育結(jié)束，1000~1500rpm離心5min。傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。4、重復(fù)步驟3兩次以上。脂溶性熒光染料cy3、cy5、cy7等。

3.粘壁細(xì)胞的染色（1）使粘壁的細(xì)胞在無菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。（4）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞2～20分鐘，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同。（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

4.顯微鏡檢測（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。（2）多色染料的同時(shí)檢測，濾光器按照以下設(shè)定：a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005

5.流式細(xì)胞儀的檢測DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測。 吲哚菁綠（Indocyanine Green，簡稱ICG）是一種廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域的熒光染料。濟(jì)南熒光染料DAPI

Super Fluor 555（效果同Alexa Fluor 555）琥珀酰亞胺酯熒光染料。中國臺(tái)灣細(xì)胞核熒光染料

所需的CY3-NHS酯的量取決于待標(biāo)記蛋白的量，以及CY3-NHS的比較好摩爾比為10。示例：假設(shè)所需的標(biāo)記蛋白為500μL2mg/mLIgG(MW=150,000)，用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯，得到所需的CY3-NHS酯體積為5.05μL，詳細(xì)計(jì)算過程如下：1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150，000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3-NHS酯)×MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯)=6.7×10-5mmol×753.88mg/mmol/0.01mg/μL=5.05μL(CY3-NHS酯)4.運(yùn)行偶聯(lián)反應(yīng)1)將室溫新鮮制備的10mg/mLCY3-NHS酯緩慢加入到0.5mL蛋白質(zhì)樣品中于溶液中，輕輕搖動(dòng)混勻，然后短暫離心，將樣品收集于反應(yīng)管底部。請(qǐng)勿混勻，否則2)將反應(yīng)管安置避光處，在接下來的間隔輕輕蛋白水解60分鐘。10-15分鐘，輕輕翻轉(zhuǎn)幾次以充分混合5.偶聯(lián)偶聯(lián)物以下方案是使用SepHadexG-25柱封閉染料-偶聯(lián)偶聯(lián)物的范例。1)根據(jù)制造說明準(zhǔn)備SepHadexG-25柱。2)將反應(yīng)混合物(來自“Runconjugationreaction”)加載到SepHadexG-25柱的頂部。3)一旦樣品在頂部樹脂表面下方運(yùn)行，立即添加PBS(pH7.2-7.4)。4)向所需樣品添加更多PBS(pH7.2-7.4)即可完成柱密封。中國臺(tái)灣細(xì)胞核熒光染料