福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

GlycOCATCH設(shè)計(jì)用于特異性結(jié)合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。親和樹脂基于無(wú)活性的Genovis的OpeRATOR酶，該酶經(jīng)過工程設(shè)計(jì)，可以高親和力結(jié)合O-糖基化蛋白和肽。 結(jié)合在pH 5-8的生理緩沖液中進(jìn)行。由于GlycOCATCH樹脂和O-糖蛋白/肽之間的強(qiáng)相互作用，可以用8M尿素進(jìn)行洗脫?；蛘?，可以使用活性O(shè)peRATOR酶進(jìn)行洗脫，該酶消化O-聚糖位點(diǎn)的N末端結(jié)合的O-糖蛋白。在后一種情況下，肽在天然條件下回收。OpeRATOR 凍干酶包含在購(gòu)買中。由于 O-糖蛋白上的旋亞氨酸化 O-聚糖與樹脂結(jié)合效率更高，因此唾液酸酶混合物 SialEXO 凍干也包含在購(gòu)買中。OmniGLYZOR特點(diǎn)：與LC-MS兼容；完全去除聚糖，改進(jìn)蛋白的分析；福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

SialEXO 2-3 在天然條件下水解糖蛋白，在 pH 值范圍為 7.0 至 9.0 時(shí)顯示出活性。該酶來源于Akkermansia muciniphila，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶具有 His 標(biāo)簽，分子量為 66 kDa。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式；2. 可以結(jié)合酶以提高用于離心柱中糖蛋白去唾液酸化的固定化酶。Genovis的SialEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的SialEXO酶，用于糖蛋白的去唾液酸化，而不會(huì)被酶污染z終制劑。它水解天然糖蛋白上的唾液酸（α2-3、α2-6 和 α2-8）并釋放出聚糖。效率；3. 適用于自動(dòng)化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。湖北固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶疾病機(jī)理研究OglyZOR 是一種內(nèi)切糖苷酶用于確認(rèn)O-糖的存在和降低樣品的異質(zhì)性。

從依那西普水解β1-3和β1-4半乳糖：Genovis的GalactEXO Immobilized 對(duì) β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖均具有酶活性，這些半乳糖存在于裝飾有 N- 和 O-連接糖基化的生物制藥中，例如 Fc-融合蛋白依那西普。將依那西普與GalactEXO固定化孵育60分鐘，并在FabRICATOR消化后使用LC-MS在亞基水平上研究酶活性。TNFR和Fc/2片段分別分析。與GalactEXO Immobilized孵育導(dǎo)致N-連接和O-連接聚糖上的半乳糖殘基水解，這在半乳糖基化物種中被視為信號(hào)丟失。對(duì)游離的N-聚糖分析證實(shí)了LC-MS數(shù)據(jù)。

Genovis的PNGase F（肽 N-糖苷酶 F）是一種糖酰胺酶，可水解多肽天冬酰胺與所有哺乳動(dòng)物天冬酰胺連接復(fù)合物、雜交或高甘露糖寡糖的內(nèi)層 GlcNAc 之間的酰胺鍵。該酶用于MS分析前的樣品制備，以降低蛋白質(zhì)異質(zhì)性并實(shí)現(xiàn)游離的聚糖分析，并研究N-聚糖的功能作用。1. 對(duì)所有哺乳動(dòng)物N-聚糖的高效水解；2.對(duì)多種糖蛋白具有活性；3.可固定在即用型離心柱產(chǎn)品形式；4. 自動(dòng)化友好型，96孔板，用于高通量 N-糖去除。Genovis的ImpaRATOR 是一種 O-糖依賴性蛋白酶，可消化攜帶粘蛋白型。O-聚糖的蛋白質(zhì)，包括唾液酸化物質(zhì)、糖基化絲氨酸和 Thr 殘基的 N-末端。該酶產(chǎn)生攜帶 O-糖的糖肽，從而實(shí)現(xiàn) O-糖譜分析、位點(diǎn)占用測(cè)定和 O-糖肽圖譜以及使用 LC-MS 分析的中級(jí)方法。1. 特異性廣 - 接受多種 O-聚糖變體，包括唾液酸化物種；2. 可靠O-聚糖特異性蛋白酶 – 消化絲氨酸/蘇氨酸糖基化位點(diǎn)的 N 末端；3. 穩(wěn)健的消化，增強(qiáng)復(fù)雜生物制藥的表征?，F(xiàn)O-糖基化藥有Tn抗原，定量he心 GalNAc 水平，減少了異質(zhì)性。

糖蛋白性能測(cè)試：O-聚糖的巖藻糖基化參與功能上重要的聚糖表位的合成，例如血型抗原和劉易斯結(jié)構(gòu)。分析用這種復(fù)雜的聚糖結(jié)構(gòu)修飾的糖蛋白可能具有挑戰(zhàn)性，需要高效和特異性的酶工具。我們?cè)谠S多糖基工程TNFR蛋白上測(cè)試了Genovis的FucosEXO，這些蛋白攜帶多達(dá)11個(gè)O-聚糖，這些O-聚糖以不同的鍵裝飾。我們將該活性與其他市售巖藻苷酶進(jìn)行了比較。FucosEXO 能夠在 1 小時(shí)內(nèi)對(duì)所有三種 TNFR 蛋白進(jìn)行去巖藻糖磺酸處理，而用其他巖藻糖酶處理導(dǎo)致部分去除巖藻糖或根本沒有去除。GalNAcEXO 用于有效水解與糖蛋白（Tn 抗原）中的絲氨酸或蘇氨酸殘基相連的 α-N-乙酰半乳糖胺 （GalNAc）。湖南PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

GalactEXO在天然條件下水解糖蛋白，并在5.5至7.5的寬pH值范圍內(nèi)顯示活性。福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

genovis分析依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖：為了確認(rèn)依那西普和曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數(shù)據(jù)，進(jìn)行了釋放的N-聚糖分析。標(biāo)記的N-聚糖的分離清楚地表明了依那西普和曲妥珠單抗上半乳糖的丟失，如半乳糖基化聚糖物種的信號(hào)丟失所示。該酶是一種有價(jià)值的工具，可降低樣品異質(zhì)性，用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復(fù)雜 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-連接的 GalNAc；2. 實(shí)現(xiàn)完全糖基去除，以改善蛋白質(zhì)表征；3. 可固定在即用型離心柱中。福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究